熒光雙標(biāo)是采用不同來源的一抗，孵育不同顏色的熒光二抗，達(dá)到不同顏色的陽性結(jié)果，分析一張切片上不同抗體的表達(dá)情況?；虿捎肨SA技術(shù)，利用抗原抗體特異性結(jié)合原理，在同一張切片上標(biāo)記來源種屬相同的兩個(gè)抗體的方法。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.石蠟切片脫蠟入水

2.抗原修復(fù)

3.封閉

4.孵育一抗

異源：

5.孵育熒光二抗

6.重復(fù)4、5步驟

同源：

5.孵育HRP二抗，孵育CY3/FITC-TSA標(biāo)記

6.重復(fù)2、4、5步驟

7.DAPI染細(xì)胞核

8.抗熒光猝滅劑封片，鏡檢

結(jié)果：

DAPI紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm，發(fā)藍(lán)光

FITC紫外激發(fā)波長465-495nm， 發(fā)射波長515-555nm，發(fā)綠光

CY3紫外激發(fā)波長510-560，       發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光.

CY5紫外激發(fā)波長 608-648nm,   發(fā)射波長672-712，發(fā)橙光