活性氧ROS檢測(cè)是利用熒光探針DCFH-DA進(jìn)行活性氧檢測(cè)的試劑盒。DCFH-DA本身沒(méi)有熒光，可以自由穿過(guò)細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無(wú)熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測(cè)DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 新鮮樣本冰凍切片

2. 孵育ROS工作液

3. DAPI染細(xì)胞核

4. 抗熒光猝滅封片劑封片，鏡檢

DAPI紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm，發(fā)射波長(zhǎng)420nm，發(fā)藍(lán)光

FITC紫外激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm， 發(fā)射波長(zhǎng)515-555nm，發(fā)綠光

CY3紫外激發(fā)波長(zhǎng)510-560，       發(fā)射波長(zhǎng)590nm，發(fā)紅光.

CY5紫外激發(fā)波長(zhǎng) 608-648nm,   發(fā)射波長(zhǎng)672-712，發(fā)橙光

結(jié)果：

細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光，陽(yáng)性呈紅色熒光