實驗步驟：

1.培養(yǎng)細胞的EdU標記及固定、洗滌和通透

a.在6孔板中(如有必要可以加入蓋玻片)培養(yǎng)適當數(shù)量的細胞。細胞培養(yǎng)過夜并且恢復(fù)到正常狀態(tài)后，進行b.將37℃預(yù)熱的EdU工作液加入6孔板中。

c.繼續(xù)孵育細胞2小時，EdU標記細胞。

d.去除培養(yǎng)液，并加入固定液，室溫固定15分鐘。

e.去除固定液，每孔PBS洗滌細胞3次，每次3-5分鐘。

f.去除洗滌液，每孔加入通透液，室溫孵育10-15分鐘。

g.去除通透液，每孔PBS洗滌細胞1-2次，每次3-5分鐘。

h.轉(zhuǎn)步驟3.

2.動物體內(nèi)EdU的標記及切片樣品的處理

a.對于小鼠，可以按照10-200mg/kg的用量，把EdU用PBS配制成一定濃度，腹腔注射、特定組織或局部注射或者加入飲用水中。具體用量跟所用動物的種類、體重和使用方式有關(guān)，可以參考相關(guān)文獻，b.4小時后或根據(jù)特定實驗確定的適當時間后，快速處死小鼠，取出所需的組織，按照常規(guī)步驟制作冰凍切片或石蠟切片。EdU標記的時間也可以參考相關(guān)文獻自行調(diào)整。

c.做冰凍切片：

d.做石蠟切片：

E.轉(zhuǎn)步驟3

3.EdU檢測

c.去除上一步驟中的洗滌液。

d.每孔加入0.5ml Click反應(yīng)液，輕輕搖晃培養(yǎng)板以確保反應(yīng)混合物可以均勻覆蓋樣品。

e.室溫避光孵育30分鐘。

f.吸除Click反應(yīng)液，用洗滌液洗滌3次，每次3-5分鐘。

g.如果需要對細胞核進行染色。

4.細胞核染色

5.拍照或掃描觀察