熒光三標是采用不同種屬的三個抗體或者TSA技術(shù)，利用抗原抗體特異性結(jié)合原理，在同一張切片上標記來源種屬相同的三種抗體的方法。

實驗步驟：

1.石蠟切片脫蠟入水

2.抗原修復(fù)

3.封閉

4.孵育一抗

5.孵育HRP二抗

6.孵育cy5/CY3/FITC-TSA標記

7.重復(fù)2遍2、4、5、6

8.DAPI染細胞核

9.抗熒光猝滅劑封片，鏡檢

結(jié)果：

DAPI紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm，發(fā)藍光

FITC紫外激發(fā)波長465-495nm， 發(fā)射波長515-555nm，發(fā)綠光

CY3紫外激發(fā)波長510-560，       發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光.

CY5紫外激發(fā)波長 608-648nm,   發(fā)射波長672-712，發(fā)橙光